Laboratorio di biologia/SDS-PAGE

Questa tecnica è utile nella separazione delle proteine in base al peso. Le proteine grazie al Sodio dodecilsolfato vengono denaturate, linearizzate e caricate negativamente in modo che posano procederere verso il catodo attraverso la matrice di poliacrilamide

Soluzioni di lavoro

Gel di poliacrilamide

• Soluzione Acrilamide/bis acrilamide (solitamente 29:1) al 30% p/v
• Soluzione B Tris 1M ph 8.8:
  • 68.32 g Tris-base
  • 29.28 g Tris-HCl
  • aggiustare il pH e portare a 0,5 L
• Soluzione stacking buffer (SB) Tris 1 M pH 6.8
  • 3.7 g Tris-base
  • 3.07 g Tris-HCl
  • Aggiustare il ph e portare a 50 ml
• Soluzione SDS 10% p/v
  • 50 g di Sodio dodecil solfato in 500 di acqua

    La polvere si dissolve molto lentamente, preparare la soluzione almeno il giorno prima

• APS 10% p/v
  • 1 g di persolfato di ammonio in 10 ml di acqua

    l' ammonio persolfato si decompone rapidamente, la soluzione indicata si mantiene a +4 °C per una sett in un contenitore schermato con foglio di alluminio. Altrimenti preparare 50 ml e fare delle aliquote di volume utile (solitamente 0,5 ml) da conservare al -20 °C.

• Temed

Tampone di diluizione del campione (Sample buffer)=

Tampone di corsa

x 1000 ml da diluire 10 volte prima dell'uso

75g Glicina 10g SDS 30g Tris Buffer

tabella