Utente:R5b43/Saggio immunologico: differenze tra le versioni
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===Elettroforesi===
Le proteine del campione sono separate coll'elettroforesi su gel. La separazione delle
===Trasferimento===
Per far sì che le proteine possano essere soggette all'azione degli anticorpi, esse sono trasferite dal gel in una membrana di '''nitrocellulosa''' o
'''polivinilidenfluoruro (PVDF)'''. Il metodo per trasferire le proteine è detto '''electroblotting''' e sfrutta una carica elettrica per far migrare le proteine dal gel alla membrana. Successivamente le proteine sono esposte su su una
[[File:Western_blot_transfer.png|thumb|center|upright=3|Fase del trasferimento]]
L'uniformità e soprattutto la riuscita del trasferimento delle proteine dal gel alla membrana può essere controllata colorando la
===Bloccaggio===
Poiché la membrana è scelta per la sua capacità di legare le proteine, occorre prevenire legami tra la membrana e l'anticorpo impiegato per il rilevamento della proteina di interesse. L'inibizione dei legami è ottenuta mettendo la membrana in una una soluzione diluita proteica - tipicamente 3-5% albumina di siero bovina o latte scremato in polvere in TBS o I-Block, con una piccola percentuale (0,1%) di detergente come Tween 20 o Triton X-100. La proteina della soluzione diluita si lega alla membrana in tutti i punti in cui le proteine non si sono legate. Quindi, quando si aggiunge l'anticorpo, questo non potrà attaccarsi a nessuno spazio della membrana eccetto i siti di legame della proteina di interesse. Ciò elimina i falsi positivi.
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