Laboratorio di biologia/Western blot: differenze tra le versioni
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===Trasferimento===
Il protocollo descritto di seguito prevede l'utilizzo di una cella di trasferimento (''wet'').
#Si parte da un [[Laboratorio/SDS-PAGE|gel di poliacrilamide]] su cui hanno corso delle proteine, lo si estrae dal supporto, si taglia via la parte dello stacking gel e lo si immerge nel transfer buffer per 15 minuti.▼
▲#Si parte da un [[Laboratorio/SDS-PAGE|gel di poliacrilamide]] su cui hanno corso delle proteine, lo si estrae dal supporto, si taglia via la parte dello stacking gel e lo si immerge
#Si immergono nello stesso tampone i due supporti spugnosi, i due rettangoli di carta assorbente e la membrana di trasferimento lasciando anche questi per lo stesso tempo.
#Si predispone poi il
#*Spugna
#*Carta
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#*Spugna
#**Prima di porre il secondo strato di carta eliminare le bolle d'aria tra la membrana e il gel con un rullo (o una pipetta) bagnati di tampone.
#Chiudere la cassettina senza disturbare il sandwich.
#Riempire l'apparato con il
#Introdurre nei binari la cassettina preparata avendo cura di rispettare le polarità
#Collegare gli elettrodi all'alimentatore selezionando l'opzione voltaggio costante ed impostando su 50 volt per due ore (nel caso sia necessario trasferire proteine fino a 60 KD) oppure 12 ore per proteine sopra i 100 KD. È bene selezionare un amperaggio massimo, nel caso in cui durante il trasferimento, l'amperaggio dovesse innalzarsi tanto da causare eccessivo calore. Se la cella può alloggiare un cubo di ghiaccio sintetico si possono selezionare 100-130 V ed
#Terminato il processo, separare la membrana ponendola in un contenitore di dimensioni appena maggiori che non abbia irregolarità sul fondo.
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