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Laboratorio di biologia/Western blot: differenze tra le versioni

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==== Generalità sul trasferimento====
In generale si utilizzano supporti di nitrocellulosa con porosità 0,45 μm; occasionalmentese le proteine da analizzare sono a basso peso molecolare, è consigliabile usare una porosità inferiore, ad esempio 0,2 μm. Occasionalmente vengono utilizzati supporti di [[w:PVDF|PVDF]] (specialmente se la membrana servirà anche per il sequenziamento proteico) o nylon.
 
A seconda dell'apparecchio usato, si parla di trasferimento ''semi-dry'' (se il tampone è fornito solo dalla carta assorbente) o ''wet'' (se il "sandwich" è immerso in una camera contenente soluzione tampone).
 
Il trasferimento avviene applicando una corrente elettrica, conin ilun catodoambiente rivoltoa versopH labasico membrana(comunemente dipH nitrocellulosa8.5). In tal modo, le proteine migreranno verso l' anodo, in quanto ad un pH basico buona parte delle proteine è carica negativamente. InPer genereaccentuare sila applicanocarica 0.8negativa V perdelle centimetro quadratoproteine, persi unutilizza tempoSDS minimoa dibassa 30concentrazione minuti(meno addell' un1%) massimoin diquanto 16esso ore,può ainibire secondail legame delle proteine daalla separaremembrana.
 
In genere si applicano 0.8 V per centimetro quadrato da trasferire, per un tempo minimo di 30 minuti ad un massimo di 16 ore, a seconda delle proteine da separare.
 
====Generalità sulla rivelazione====
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