Utente:R5b43/Clonaggio: differenze tra le versioni
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L'elettroporazione è un altro metodo di trasformazione. In questo metodo le cellule sono brevemente sottoposte a un campo elettrico di 10-20 kV/cm che creerebbe i pori tramite i quali i plasmidi possono entrare. Dopo lo shock elettrico i buchi sono subito chiusi dai meccanismi di riparazione della membrana cellulare.
=== Selection ===
The introduction of recombinant DNA into the chosen host organism is usually a low efficiency process; that is, only a small fraction of the cells will actually take up DNA. This makes a selection step necessary, in which only cells that have taken up the DNA with the selectable marker will survive.
When bacterial cells are used as host organisms, the selectable marker is usually a gene that confers resistance to an antibiotic, typically ampicillin. The step is carried out by plating the solution containing the transformants on agar plates with the antibiotic and incubating them at 37 °C overnight. Cells harboring the plasmid will survive and form colonies, while those that have failed to take up plasmid sequences will die.
==Selezione==
L'introduzione di DNA ricombinante nell'organismo ospite è solitamente poco efficiente, ossia una piccola parte delle cellule inglobano il DNA. Ciò rende la fase della selezione necessaria, nella quale solo le cellule che hanno preso le acquisito il DNA col marcatore selettivo sopravvivono.
Quando le cellule batteriche sono usate come organismi ospiti, il marcatore selettivo è solitamente un gene che conferisce resistenza a un antibiotico, tipicamente l'ampicillina. In questa fase si applica la soluzione contenente le cellule trasformate in lastre di agar coll'antibiotico e li si lascia riposare una notte a 37 °C. Le cellule contenenti il plasmide sopravviveranno e formeranno colonie, mentre le cellule che non sono riuscite a inglobare il plasmide moriranno.
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