Laboratorio di biologia/Elettroforesi: differenze tra le versioni
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Esistono vari tipi di supporto:
*Carta da filtro: il più economico ed il più facilmente reperibile. Viene usata sotto forma di
*Acetato di cellulosa: superiore alla semplice cellulosa, in quanto non presenta fenomeni di adsorbimento, ha una elevata porosità che implica migrazione più lenta con formazione di bande più nette e strette, si ha meno diffusione delle bande e la diafanizzazione risulta più agevole.
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Per l’identificazione dei componenti sul supporto si possono utilizzare vari metodi quali la fluorescenza, l’assorbimento di luce in UV, l’autoradiografia… Per le proteine sieriche si procede a colorazione utilizzando soluzioni di sostanze coloranti che hanno la proprietà di legarsi ad esse (es. amido di schwarz, verde di bromofenolo). Se si vogliono evidenziare componenti proteiche particolari, si ricorre a coloranti specifici come il nero sudan per le lipoproteine, il PAS per le glicoproteine, la benzidina-H2O2 per i complessi aptoglobina-emoglobina.. Se invece si vuole evidenziare una singola frazione proteica si ricorre alle reazioni Ag/Ab, ottenendo degli archi di precipitazione (evidenziati meglio in seguito a colorazione).
Gli elettroferogrammi (
*Eluizione dal supporto: consiste nel tagliare il supporto in corrispondenza delle zone di separazione delle diverse frazioni, l’eluizione del complesso proteina-colorante e la successiva analisi spettrofotometrica della soluzione colorata
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