Laboratorio di biologia/Western blot: differenze tra le versioni

 

Il '''western blot''' o '''immunorivelazione''' è una tecnica [[w:immunochimica|immunochimica]] che permette di identificare la presenza di una determinata [[w:proteina|proteina]] in una miscela di proteine separate [[Laboratorio/SDS-PAGE|elettroforeticamente]], mediante il riconoscimento da parte di [[w:anticorpo|anticorpi]] specifici. Esistono poi variazioni quali il ''dot blot'' o ''slot blot'', in cui la miscela proteica non viene separata in base alle dimensioni ma ci si affida alla selettivitá antigene/anticorpo per rilevare esclusivamente la presenza o meno dell'antigene. Successivamente le proteine vengono trasferite su un supporto, che comunemente è una membrana di [[w:nitrocellulosa|nitrocellulosa]], e quindi si procede alla reazione immunomediate ed alla rivelazione enzimatica del complesso antigene/anticorpo.

#Disporre in una cassetta di sviluppo con interposta un foglio di cellophane la mabrana sgocciolata e una lastra fotografica su cui si è riprodotto il taglio di un angolo che dovrà coincidere perfettamente con quello della membrana

#Sviluppare la lastra secondo le istruzioni fornite dal fornitore

 

[[Immagine:Western blot 4.png|western blot per una proteina di circa 30 kD]]

 

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