Laboratorio di biologia/Western blot: differenze tra le versioni
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Il [[w:western blot|western blot]] o immunofissazione consite nell'identificare la presenza di una determinata [[w:proteina|proteina]] su un supporto, che di solito è la [[w:nitrocellulosa|nitrocellulosa]]. Sul supporto sono state precedentemente trasferitele proteine precedentemente corse su di un gel di [[w:poliacrilammide|poliacrilammide]]. Questa tecnica si usa quando il campione corso è composto da una miscela di moltissime proteine tali che con una colorazione standard (blu comassie o nitrato di argento) non si riuscirebbe a distingueerle l'una dall'altra, oppure quando pur avendo bande discrete, la proteina di interesse è in quantità troppo basse per essere visibile con le altre tecniche, infatti il western possiede tre step di amplificazione del segnale e quindi rende visibili anche decimi di picomoli (10<sup>-10</sup>mol) di proteina.
Si usa come tampone base il [[Laboratorio/Appendice 1#NET|NET]] o il [[Laboratorio/Appendice 1#TTBS|TTBS]] o comunque tamponi con pH vicino alla neutralità con piccola percentuale di un detergente (SDS, Tween20, NP-40). Essendo questi equivalenti, Il western blot è una tecnica molto robusta, di seguito la soluzione scelte verrà chiamata semplicemente tampone.
In passato si utilizzava un sistema di trasferimento per capilarità, oggi invece si usano sitemi di trasferimento a diferenza di potenziale, effettuato in una cella apposita con due camere separate o in comunicazione, con in mezzo il ''"sandwich"'' di trasferimento.
La proceduraverrà qindi separata in due parti: il trasferimento delle proteine e la rivelazione. Questa seconda parte è comune con la tecnica del [[Laboratorio/Dot blot|Dot blot]] e con il [[Laboratorio/Lectin blot|Lectin blot]] (con le dovute variazioni che saranno specificate nel testo)
[[Immagine:Western blot 4.png|western blot per una proteina di circa 30 kD]]
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