Laboratorio di biologia/Conta cellulare spettrofotometrica: differenze tra le versioni

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Spesso si rivela necessario in alunialcuni esperimenti determinare in maniera quantitativa la quantità di cellule aderenti ad una piastra di coulturacoltura prima e dopo un esperimento. Sono stati proposti molti metodi colorimerici, uno di rapida esecuzione, effettuabile con materiali di facile reperimento, è il test con il [[w:cristal violetto|cristal violetto]] un colorante idrosolubile con affinità per il [[w:DNA|DNA]] a ph neutro, solubile a ph acido.
 
==Materiali==
 
*Fissante: formalina tamponata al 4% o 10%, oppure metanolo assoluto
*Cristalvioletto (in cristalli o in soluzione) da portare ad una concentrazione di 0,1-0,3% w/w in acqua distilatadistillata
*Acido acetico 30% v/v
*Spettrofotometro che lavori nel visibile
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**Incubare per 30 min
*Lavare con acqua distillata 2 volte
*Aggiungere La soluzione di cristal volettovioletto nella stassastessa quantità dl fissante
**incubare 30 min
*Lavare 4-5 volte (fino a quando l'acqua del lavaggio sia trasparente)
*Aggiungere la soluzione di ac. Acetico nelenelle quantità del fissante ed attendere fino a completa dissoluzione del colorante, agitando
*Leggere con lo spettrofotometro a 595 nm
 
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[[Categoria:Laboratorio|Conta cellulare spettrofotometrica]]
 
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