Laboratorio di biologia/Western blot: differenze tra le versioni

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#Versare circa 20 ml di soluzione di [[w:Rosso Ponceau|Rosso Ponceau]] (soluzione allo 0,1%, in acido acetico 1%) nella vaschetta messa su un agitatore oscillante per 5 min; drenare il colorante e decolorare con acqua distillata fino a quando non siano visibili le bande. Il colorante può essere riusato per un centinaio di volte.
#*Questo passaggio serve per valutare l'efficienza del trasferimento, la presenza di bolle, evidenziare l'area di lavoro e le [[Wikt:lane|lane]]s corse. Queste informazioni sono utili per tagliare la membrana e ridefinire l'area utile, separare le varie lanes o verticalmente o orizzontalmente, destinando a trattamenti diversi i vari pezzi.
#*E'È utile in questo passaggio incidere con un bisturi o taglierino nuovo dei minuscoli triangolini sul bordo della membrana per orientarsi quando la membrana sarà totalmente bianca: sul bordo alto in corrispondenza dei bordi delle singole lanes; Sul bordo prossimo ai pesi molecolari, in corrispondenza delle bande. Conviene inoltre tagliare una porzione dell'angolo in basso a sinistra (le due facce della membrana non sono uguali). Se non interferisce con il particolare anticorpo utilizzato, è anche possibile usare una penna con inchiostro blu.
#*È consigliabile disegnare sul foglio provvisorio dell'esperimento la forma della membrana, la posizione dei triangolini con i numeri delle lanes e dei pesi molecolari e dell'angolo tagliato, le bande più evidenti alla colorazione con il rosso, eventuali bolle e, se si è tagliata la membrana, una mappa della stessa. In alternativa, è possibile inserire la membrana colorata con il rosso ponceau fra due fogli lucidi e fare una fotocopia della membrana.
#Opzionalmente si può colorare anche il gel di poliacrilamide residuo in coomassie blu per verificare l'efficienza di trasferimento.